Дослідники описали роль GRP75 у контролі якості між органелами

Дослідники з китайських наукових установ описали механізм міжорганельного контролю якості в клітинах, залежний від білка GRP75. У роботі, опублікованій у Nature, цей процес пов’язують зі структурами SIMPA, що формуються в умовах клітинного стресу.

Автори дослідження вивчали появу SIMPA в культурах клітин U-2OS і HeLa. За наведеними даними, формування таких структур спостерігали після обробки перекисом водню та теплового стресу за температури 42 °C. Їх також фіксували після фотостресу із застосуванням флуоресцентних сполук і під дією інгібіторів мітохондріального дихального ланцюга, зокрема ротенону, антиміцину A, азиду натрію та олігоміцину.

Спостереження за SIMPA

Для візуалізації структур дослідники застосували конфокальну та структуровану ілюмінаційну мікроскопію, а також електронну томографію. У додаткових даних статті наведено спостереження за формуванням і ростом SIMPA в часовій послідовності та змінами мітохондріальних крист. Автори також виділяли мітохондріальні фракції й аналізували SIMPA-позитивні та SIMPA-негативні зразки методом проточної цитометрії та протеоміки.

Окремі експерименти показали, що появу SIMPA можуть індукувати барвники MitoTracker Red, DeepRed і Green. Науковці порівнювали короткочасне фарбування з подальшим відмиванням барвника та безперервне фарбування протягом 24 годин, оцінюючи кількість і розмір структур.

Стрес і білкові агрегати

У роботі також перевіряли зв’язок SIMPA з накопиченням білкових агрегатів. У клітинах U-2OS автори експресували варіант білка ΔOTC–GFP і застосовували інгібітор протеасоми MG132. Мікроскопія продемонструвала колокалізацію структур SIMPA з агрегатами ΔOTC–GFP за різних рівнів експресії плазміди.

Дослідження виконали фахівці Нанькайського університету в Тяньцзіні, Центральної лікарні Циндао та інших китайських установ. Автори вказали, що повні версії гелів і блотів, вихідні зображення, томограми та протеомні набори даних доступні разом зі статтею та в репозиторії Figshare.